1.将培养基加入培养液
2.放入高压消毒釜内进行灭菌处理。
3.取出培养基。
4.将灭菌后的培养基,放入培养箱内
5.保持培养箱内温度为34-37℃
6.放置48-72小时
7.检查是否出现生长菌斑,出现菌斑,倒掉重新制作。
培养基在使用前通过高压或过滤灭菌,防止污染应该注意以下事项:
(1)确认工作细胞库是否被污染,确认毒种工作种子批是否被污染,确认所用培养基及其添加成分(如小牛血清、NaHCO3等)是否被污染,均可用细菌、真菌及支原体无菌试验来确认并排除。
同时要对无菌试验培养基的灵敏度进行验证。实际生产中,可以从配制好的培养液中取少量加入营养琼脂于恒温培养箱内培养,48小时即可观察有无污染。