利用高压下的高温饱和蒸汽杀灭所有微生物及其芽胞，灭菌效果可靠，是物理灭菌法中最有效的方法。当压力在103～137kPa（15～20磅/平方英寸），温度达121～126℃时，经20～30分钟即达灭菌目的。适用于耐高温、耐高压、耐潮湿物品的灭菌如敷料、手术器械、搪瓷类物品及某些药品、细菌培养基等。目前医院常用的有手提式压力蒸汽灭菌器、卧式压力蒸汽灭菌器、预真空压力蒸汽灭菌器等。
灭菌效果监测方法：留点温度计、化学指示管（卡）监测、化学指示胶带监测、生物监测法。其中生物监测法为最可靠的监测法。
高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽,待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。
导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的
