基因表达载体的构建是基因工程的核心步骤,而基因表达载体的本质是DNA,组成元素有碳氢氧氮磷,其中氮在含氮碱基中,磷在磷酸基团中
完整的表达载体必须包括:
1、复制子,在细菌中扩增时所必须.
2、启动子,目的基因在细菌或细胞中转录所必须,转录了才能翻译,是谓“表达”.
3、原核筛选标记,细菌增菌所必须.
4、真核筛选标记,如果是真核表达,就是必须的.
5、多克隆位点,即酶切位点,插入目的片段的区域.
6、其他所需构件,可视实验设计情况而选用现成载体或在载体上自行添加.
另:表达的起始和终止,在目的基因上附带起始密码子和终止密码子.
1、技术原理:
过表达载体主要是将目的基因的编码区(CDS)构建到相应的质粒或者病毒载体中,达到在目的基因过量表达的作用。常规过表达载体主要元件:Promoter—gene—linker—Fluorescent gene—抗药筛选gene。基因过表达载体又可以分为广泛启动子基因表达载体,组织特异性启动子基因表达载体和诱导启动子基因表达载体等,以达到不同研究所需要的目的。
2、技术优势:
① 多种工具载体可选,可提供各种基因表达载体构建服务;
② 多种工具载体经过优化,拷贝效率高,能促使目的基因在细胞中大量表达;
③ 具有丰富分子克隆经验和专业技术研究团队,载体插入目的片段最长能达10kb。
3、质量控制:
① 基因序列测序
② 载体酶切鉴定
③ 载体实验报告
4、应用:
功能学,药物靶点筛选,细胞信号传导通路分析,疾病治疗等等。