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蛋白质凝胶电泳的详细步骤比如转膜应该注意哪些问题(三种蛋白质电泳技术比较表格)

蛋白质凝胶电泳的详细步骤比如转膜应该注意哪些问题(三种蛋白质电泳技术比较表格)

更新时间:2024-05-24 17:06:49

蛋白质凝胶电泳的详细步骤比如转膜应该注意哪些问题

不能。转膜不及时造成扩散。蛋白在凝胶中是会弥散的,通常都是完成电泳后就尽快转膜,否则弥散后有些实验结果就无法判断了。转膜时的注意事项:

1、转膜缓冲液:甘氨酸 2.9g;Tris 5.8g;SDS 0.37g;甲醇200ml;加双蒸水定容至1000ml。

2、转膜装置从下至上依次按阳极碳板、24层滤纸、NC膜、凝胶、24层滤纸、阴极碳板的顺序放好,滤纸、凝胶、NC膜精确对齐,每一步去除气泡,上压重物,将碳板上多余的液体吸干。接通电源,恒流,转移1.5h。

3、转移结束后,断开电源将膜取出,割取待测膜条做免疫印迹。将有蛋白标准的条带染色,放入膜染色液中50s后,在50%甲醇中脱色至背景清晰,然后用双蒸水洗,风干夹于两层滤纸中保存,留与显色结果作对比。扩展资料1、用于分离和纯化双链DNA片段的非变性聚丙烯酰胺凝胶。在未变凝胶中分离DNA的缺点是DNA的迁移率受碱基组成和序列的影响。由于无法得知未知DNA的迁移是否反常,不能用未变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳确定双链DNA的大小。2、用于分离及纯化单链DNA片段的变性聚丙烯酰胺凝胶。

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