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亚硝酸盐检测方法及步骤(亚硝酸盐检测的常用方法及原理)

亚硝酸盐检测方法及步骤(亚硝酸盐检测的常用方法及原理)

更新时间:2024-04-06 03:56:00

亚硝酸盐检测方法及步骤

   食品中亚硝酸盐的快速检测-盐酸萘乙二胺法

1 范围

本方法规定了食品中亚硝酸盐的快速检测方法。 

本方法适用于肉及肉制品(餐饮食品)中亚硝酸盐的快速测定。

2 原理

样品中的亚硝酸盐经提取后,在弱酸性条件下与对氨基苯磺酸重氮化后,再与盐酸萘乙二胺反应生成紫红色偶氮化合物,其颜色的深浅在一定范围内与亚硝酸盐含量成正相关,通过色阶卡进行目视比色,对样品中亚硝酸盐进行定性判定。

3 试剂和材料

除另有规定外,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的二级水。

3.1 试剂

3.1.1 对氨基苯磺酸。

3.1.2 盐酸萘乙二胺。

3.1.3 盐酸。

3.1.4 盐酸(20%):量取20mL盐酸,用水稀释至100mL。

3.1.5 对氨基苯磺酸溶液(4g/L):称取0.4g对氨基苯磺酸,溶于100mL20%盐酸中,混匀,置棕色瓶中,临用新制。

3.1.6 盐酸萘乙二胺溶液(2g/L):称取0.2g盐酸萘乙二胺,溶解于100mL水中,混匀,置棕色瓶中,临用新制。

3.2 参考物质

亚硝酸钠参考物质中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量见表1,纯度≥99%。

表1 亚硝酸钠中文名称、英文名称、CAS登记号、分子式、相对分子质量

中文名称

英文名称

CAS登录号

分子式

相对分子质量

亚硝酸钠

Sodiumnitrite

7632-00-0

NaNO2

69.00

3.3 标准溶液配制

亚硝酸钠标准工作液(200µg/mL,以亚硝酸钠计):精密称取适量经110℃—120℃干燥恒重的亚硝酸钠参考物质(3.2),加水溶解,移入250mL容量瓶中,加水稀释至刻度,混匀。

3.4 材料

亚硝酸盐快速检测试剂盒:适用基质为肉及肉制品,需在阴凉、干燥、避光条件下保存。

4 仪器和设备

4.1 移液器:200µL,1mL

4.2 涡旋混合器或超声仪

4.3 电子天平或手持式天平:感量为0.01g和0.0001g

4.4 离心机

4.5 微孔滤膜:0.45μm(水系)

5 分析步骤

5.1 试样制备

取适量有代表性样品的可食部分,充分粉碎混匀。

5.2 试样的提取

准确称取试样1g(精确至0.01g),置于离心管中,准确加水10mL,超声或涡旋振荡提取5min,静置10min。准确吸取1mL上清液(如样品浑浊,≥3000r/min离心5min取上清液,或经微孔滤膜过滤后取续滤液)于检测管中,向检测管中滴加对氨基苯磺酸溶液200μL,混匀静置1min,再加入盐酸萘乙二胺溶液100μL,混匀静置5min,即得待测液。

5.3 测定步骤

将待测液与标准色阶卡目视比色,10min内判读结果。进行平行试验,两次测定结果应一致,即显色结果无肉眼可辨识差异。

5.4 质控试验

每批样品应同时进行空白试验和质控样品试验(或加标质控试验)。用色阶卡和质控试验同时对检测结果进行控制。

5.4.1 空白试验

称取空白样品,按照5.2和5.3步骤与样品同法操作。

5.4.2 质控样品试验(或加标质控试验)

亚硝酸盐质控样品:采用典型样品基质或相似样品基质按照实际生产工艺生产的,含有一定量亚硝酸盐,并可稳定保存的样品。经参比方法确认的质控样品中亚硝酸盐含量(以亚硝酸钠计)应包括但不限于10mg/kg。

加标质控样品:准确称取空白试样1g(精确至0.01g),置于离心管中,加入适量亚硝酸钠标准工作液(200µg/mL)(3.3)使样品中亚硝酸钠含量为10mg/kg。

质控样品(或加标质控样品)按5.2和5.3步骤与样品同法操作。

6 结果判定要求

观察检测管中样液颜色,与标准色阶卡比较判读样品中亚硝酸盐(以亚硝酸钠计)的含量。颜色浅于检出限(1mg/kg)则为阴性样品;颜色深于10mg/kg则为阳性样品。色阶卡见图1。

注:1.颜色接近或深于1mg/kg,但浅于或接近10mg/kg时,则考虑本底污染或带入所   2.10mg/kg仅作为本方法的本底控制限。

                       图1 亚硝酸盐色阶卡

质控试验要求:空白试验测定结果应为阴性,质控样品试验测定结果应在其标示量值允差范围内,加标质控试验测定结果应与加标量相符。

7 结论

由于色阶卡目视判读存在一定误差,为尽量避免出现假阴性结果,读数时遵循就高不就低的原则。当测定结果大于10mg/kg时,应对结果进行确证。

8 性能指标

8.1 检测限:1mg/kg。

8.2 灵敏度:灵敏度应≥99%

8.3 特异性:特异性应≥85%。

8.4 假阴性率:假阴性率应≤1%。

8.5 假阳性率:假阳性率应≤15%。

注:性能指标计算方法见附录A。

9 其他

本方法所述试剂、试剂盒信息及操作步骤是为给方法使用者提供方便,在使用本方法时不作限定。方法使用者在使用替代试剂、试剂盒或操作步骤前,须对其进行考察,应满足本方法规定的各项性能指标。

本方法参比方法为GB 5009.33-2016《食品安全国家标准食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定—第二法分光光度法》。

待测样品中若存在高含量的亚硫酸氢钠、抗坏血酸或酱油时,会对本法的显色结果产生一定影响,检测时应予以注意。

色阶卡应确保在试剂盒保质期内不出现褪色或变色的情况。

 

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