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把目的基因连接到质粒上构建重组质粒时该如何选择限制性内切酶 引物如何设计(基因引物设计的详细步骤文库)

把目的基因连接到质粒上构建重组质粒时该如何选择限制性内切酶 引物如何设计(基因引物设计的详细步骤文库)

更新时间:2024-04-12 21:55:07

把目的基因连接到质粒上构建重组质粒时该如何选择限制性内切酶 引物如何设计

方法非常多,列举一两个:

1.

不同的粘性末端不能相连。所以,如果要相连,就要去除不同的粘性末端,进行平末端相连。

粘末端变成平末端有两种方法:klenow酶的补平或者s1核酸酶的切平。

为了减少载体自连,可以用碱性磷酸酶处理载体。

最后将载体和目的基因链接,构建重组质粒。

2.

设计引物,自带酶切位点,扩增目的基因,直接改变目的基因的酶切位点,然后再用和载体相同的限制酶酶切目的基因,切出相同的粘性末端。

直接将酶切完成的目的基因和载体连接。

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