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hela细胞培养方法(hepg2细胞详细的培养方法)

hela细胞培养方法(hepg2细胞详细的培养方法)

更新时间:2024-04-04 02:47:48

hela细胞培养方法

答:

hela细胞培养方法如下:

1.将hela细胞分装到含有DMEM培养基和10%胎牛血清的培养皿中。

2.将培养皿放入37℃恒温培养箱中,保持5%CO2含量,进行培养。

3.每隔2-3天更换一次培养基,直到细胞密度达到所需的数量。

4.使用胰酶或EDTA将细胞从培养皿中剥离下来,进行下一步实验。

原因:

hela细胞是一种常用的人类癌细胞系,广泛应用于生物医学研究中。

培养hela细胞需要提供适宜的培养基和培养条件,以保证细胞的正常生长和增殖。

同时,定期更换培养基可以去除细胞代谢产物和细菌等杂质,保证细胞的健康生长。

使用胰酶或EDTA将细胞剥离下来,可以方便地进行下一步实验。

延伸:

hela细胞的培养方法还有很多种,如使用无血清培养基、添加生长因子等。

在实验中需要根据具体情况选择合适的培养方法。

同时,hela细胞的培养也需要注意细胞的纯度和无菌性,以避免实验结果的误差。

hela细胞的培养条件为:

高糖DMEM培养基,100ml/l胎牛血清;培养液中一般血清含量为10%

传代步骤: 1. 倒去细胞培养液(对于小口的培养瓶可采用顷倒方法,对于培养皿,必须用吸管吸出)

2. 吸取适量的PBS加入培养瓶中,轻轻振荡后弃去重复一次,以清于血清成分,

利于胰酶消化

3. 加入适量0.25%胰蛋白酶(一般100mm培养皿可加入1ml,15cm 培养瓶加入5-8滴)转动培养瓶,使其湿润整个细胞房,高温下消化2-3分钟。

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翻转培养瓶,肉眼观察细胞单层,见细胞单层薄膜出现针孔大小空隙时即可顷去消化液,如消化程度不够可延长消化时间,或置于37°C孵箱中加速胰酶作用如见大量细胞片装脱落,已消化过头,则不能顷倒消化液而直接进行下一步操作

4. 加入适量培养液终止消化

吸取瓶中培养液反复冲瓶壁上的细胞层,至全部冲下轻轻吹打,混匀,成细胞悬液取样计数,调整细胞浓度为5′10 /ml

15cm 培养瓶培养时,吸取1ml细胞悬液加到新培养瓶中,加入4ml培养液,盖好,置37°C孵箱中培养。

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传代的天数要以HELA细胞的生长密度为基础,细胞密度大了就要传,应该每天观察HELA细胞,注意其生长状态.HELA细胞的生长分5期:

游离期

细胞经消化分散后,由于愿生质收缩及细胞弹性,细胞成圆形,折光性强,呈悬浮状态。

吸附期

接种24小时后,由于细胞的附壁特性,开始贴壁,圆形细胞变成延展状态。

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繁殖期

细胞快速生长、分裂,形成细胞岛直至细胞单层。

维持期

细胞形成单层后生长与分裂减缓、折光性减弱,细胞内颗粒增多,由于代谢物的积累,CO2增多,培养液变黄。

衰退期

如不及时换液和传代,由于营养缺乏、代谢物积累,细胞内颗粒进一步增多,立体感差,细胞皱缩、脱落、逐渐衰老死亡。

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应该在其维持期和衰退期及时换液.一般而言是4天换一次液.

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