一、培养容器的选择 培养红茶菌最好使用玻璃容器，以便观察培养情况，瓷制容器亦可，但不便观察其中培养情况，需要取出培养液进行观察。
搪瓷容器可作短期培养，不能长期使用。
不能用铁制、铝制、铜制等金属容器培养红茶菌。
培养容器在使用前，必须要用蒸煮或开水烫洗消毒，以免造成杂菌感染而导致培养失败。
二、培养液的配制 培养红茶菌的原料主要是茶水和食糖。
茶水用红茶、绿茶、花茶泡制均可。
茶叶的品质对红茶菌的培养影响不大，为降低成本，可选用价格低廉的茶叶，但绝不能使用霉变的茶叶。
食糖可用白糖、砂糖、冰糖、葡萄糖或蜂蜜，其中以葡萄糖最好，培养的红茶菌生长最快。
不要使用红糖或饴糖培养红茶菌，因其杂质含量高，培养出的红茶菌味道不好，而且容易发霉变质。
水要求洁净卫生。
配制时，糖、茶、水的比例是5∶0.1∶100～5∶0.4∶100。
配制方法：先用开水沏茶，趁热把糖溶化其中，等茶水凉后用纱布滤去茶叶，将茶水装于玻璃瓶等容器中，当茶水温度降至30℃时即可接种。
三、接种培养 首次培养红茶菌需要购买菌种，已培养好的红茶菌菌液和菌膜（菌液上面漂浮的一层像海蜇皮一样的膜）都可作为菌种，最好是二者同时使用。
接种时，将菌液与培养液按1∶4的比例在容器中混合均匀即可，但菌膜的用量最好不少于容器横截面积的一半。
然后用干净纱布或手帕盖住容器口，用绳索扎紧，这样既能防尘土和防止果蝇钻入下蛆，又可保证通气，有利于菌膜形成，防止杂菌污染。
接种后将容器置于无阳光直射的地方，在25℃～32℃下静止培养，培养期间不要摇动容器，温度不要过高或过低，经10天左右培养，红茶菌即可成熟。
四、成熟红茶菌的处理 当红茶菌液表面菌膜呈乳白色，菌液不再冒气泡，澄清透明，颜色比原来的茶水色浅，酸味浓，用pH值试纸测定其pH值已达3.0以下时表面红茶菌已培养发酵成熟。
将成熟的红茶菌液小心地由培养容器倒入保存菌液的容器中（注意不要使底部淡褐色的沉淀物随菌液流出）。
此菌液在室温下可保存2个月或更长时间，可陆续饮用或分装上市。
如果放置时间较长，菌液表面重新长出薄薄的菌膜，并不影响质量，可以继续使用。
五、红茶菌的再培养 将培养成熟的红茶菌处理后，用消毒后的镊子把容器内残余的菌膜取出，去除菌膜上面变褐的部分，再用凉开水冲洗菌膜数遍。
将容器底部的沉淀物倒掉，用凉开水洗净容器，倒入菌液和培养液及处理好的菌膜，再按上述方法继续培养红茶菌。
六、红茶菌的饮用 红茶菌可喝原液，也可用凉开水或温开水冲稀了喝，适当加些糖亦可。
每日饮用2次～3次，每次饮用20毫升～30毫升。
饮用量不可过度，以防刺激肠胃收缩，引起肚子疼或拉稀。
不要与其他药物同时服用，如需服药，应错开1小时～2小时。
有的人开始饮用红茶菌时，会出现面部发热、发红及腹泻等不适现象，继续饮用一段时间后不适现象即可消失。
