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菌落原位杂交法的步骤(菌落原位杂交最后要检测什么)

菌落原位杂交法的步骤(菌落原位杂交最后要检测什么)

更新时间:2024-01-12 01:23:08

菌落原位杂交法的步骤

①将硝酸纤维素滤膜置于含抗生素的平皿琼脂培养基上,用无菌牙签挑取单菌落种于滤膜和主琼脂平板上,排列成方格栅,膜和板上菌落位置相同。

②培养细菌至产生1-2mm大小的菌落。

③在一块平皿中置4张滤纸,用10%SDS浸透,倒掉多余液体,将带有菌落的滤膜取下轻轻置于滤纸上,菌落面在上,注意防止滤膜底面存有气泡。

④5min后,将滤膜转至用变性溶液(0.5mol/L NaOH,1.5mol/LNaCl)浸湿的滤纸上,放置10min。

⑤将滤膜转至中和溶液(1.5mol/L NaCl, 0.5mol/L Tris-HCl

pH8.0)浸湿的滤纸上,放置10min,重复中和一次。

⑥将滤膜移至用2×SSPE溶液浸过的滤纸上,放置10min,SSPE配成20×贮备液:3.6mol/L NaCl,0.2mol/L

NaH2PO4(pH7.4),20mmol/L EDTANa2(pH7.4)。

⑦将滤膜用滤纸吸干,80℃真空烘干2h。

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