将制备的Giltay液体培养基，加入大试管( 20mm×200mm)中，把缠有细线的小试管 ( 12mm×75mm ) 倒立放入大试管中，将小试管中的气体排净，塞住大试管，留部分细线在大试管外，便于小试管的提升和降落，灭菌备用。
用 Giltay液体培养基2mL洗下活化后的菌株， 转入盛有小试管和Giltay液体培养基的大试管中，将小试管提升一段距离，以便接收气体，接种时注意不要使小试管内进入气体。每个菌株接4支试管，30℃恒温培养10～14d，观察结果。重复3次。
1.首先，必须为硝化细菌准备附着物，一般表面积大、多孔的材料最合适，如生物球、陶瓷环等,沙石也可作为附着物。
2.附着物体积应占水族箱总水体的20% 左右，而且需有充分的水流经过，不可形成死角，出现缺氧区。接下来就可以培养硝化细菌了。
3.硝化细菌一般不需要特殊接种培养,运转正常的水族箱附着物上会自然生长出硝化细菌,在淡水水族箱中培育出成熟的硝化细菌需要1~2 周的时间,海水水族箱约需要1个月。
4.硝化细菌在没有氨氮的情况下生长量是很少的，如此时放人大量的鱼，则硝化细菌无法承担分解氨氮的工作，因此在培养硝化细菌时必须在水中添加氨氮，以刺激其大量生长。
5.家庭中使用的方法是先放入少量的鱼，待硝化细菌成熟后再逐步增加放鱼的数量。如急需使用大量的硝化细菌，也可采用接种的方式,放入一些市汤上出售的硝化细菌成品，可在5 天内建立起一个良好的生态系统。
硝化细菌对生存环境要求不高，与鱼类生存环境相仿,甚至更宽松些,但水质过度酸化、缺氧和对附着物过分的清洗均会对硝化细菌造成损害，因此，不要长时间关闭循环过滤系统,也不可用硝化细菌附着物做初级滤材
