知道。
电影最后,彼得·帕克回到房间,刚刚把头套摘下来并且身上还穿着蜘蛛侠的战斗服,梅姨进屋看见正在换装的彼得,因此知道他是蜘蛛侠。
在老版第二部的结尾M.J知道了彼得帕克是蜘蛛侠。梅姨从头到尾都不知道彼得帕克是蜘蛛侠。