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苯酚 氯仿 异戊醇抽提DNA的原理 以及这三者的作用是什么(酚氯仿法提取dna步骤)

苯酚 氯仿 异戊醇抽提DNA的原理 以及这三者的作用是什么(酚氯仿法提取dna步骤)

更新时间:2024-04-13 23:25:31

苯酚 氯仿 异戊醇抽提DNA的原理 以及这三者的作用是什么

苯酚,氯仿,异戊醇抽取DNA的原理反正是通过他们作为同分异构体的相似性质,通过有机溶剂没有办法分解。

他们反而可以使得存在于DNA的那些杂质,比如蛋白,多糖,酚类,被筛选掉。

它可以使蛋白质变性,并抑制降解,氯仿的作用是克服酚的缺点;加速有机相与液相分层。

最后用氯仿抽提:去除核酸溶液中的迹量酚。,这三者的作用就是为了保护核酸不被破坏,同时能够排除掉dna以外的物质。

苯酚、氯仿、异戊醇抽提DNA的原理是通过有机溶剂抽提,去除蛋白,多糖,酚类等杂质,再加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。

使用苯酚抽提细胞DNA时,苯酚的作用是使蛋白质变性,同时抑制了DNase的降解作用。

用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。

蛋白分子溶于酚相,而DNA溶于水相。

氯仿的作用是克服酚的缺点;加速有机相与液相分层。

最后用氯仿抽提:去除核酸溶液中的迹量酚。(酚易溶于氯仿中)

用酚-氯仿抽提细胞基因组DNA时,通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇,为什么?

因为异戊醇可以减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。

异戊醇可以降低表面张力,从而减少气泡产生。

另外,异戊醇有助于分相,使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。

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