苯酚,氯仿,异戊醇抽取DNA的原理反正是通过他们作为同分异构体的相似性质,通过有机溶剂没有办法分解。
他们反而可以使得存在于DNA的那些杂质,比如蛋白,多糖,酚类,被筛选掉。
它可以使蛋白质变性,并抑制降解,氯仿的作用是克服酚的缺点;加速有机相与液相分层。
最后用氯仿抽提:去除核酸溶液中的迹量酚。,这三者的作用就是为了保护核酸不被破坏,同时能够排除掉dna以外的物质。
苯酚、氯仿、异戊醇抽提DNA的原理是通过有机溶剂抽提,去除蛋白,多糖,酚类等杂质,再加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。
使用苯酚抽提细胞DNA时,苯酚的作用是使蛋白质变性,同时抑制了DNase的降解作用。
用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。
蛋白分子溶于酚相,而DNA溶于水相。
氯仿的作用是克服酚的缺点;加速有机相与液相分层。
最后用氯仿抽提:去除核酸溶液中的迹量酚。(酚易溶于氯仿中)
用酚-氯仿抽提细胞基因组DNA时,通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇,为什么?
因为异戊醇可以减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。
异戊醇可以降低表面张力,从而减少气泡产生。
另外,异戊醇有助于分相,使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。