同源重组构建质粒原理及方法（重组质粒的构建流程）

原理依赖于限制性核酸内切酶,DNA 连接酶和其他修饰酶的作用,分别对目的基因和载体 DNA 进行适当切割和修饰后,将二者连接在一起,再导入宿主细胞,实现目的基因在宿主细胞内的正确表达。

传统的构建重组质粒的方法为TA克隆。该方法需要将构建进载体的片段通过PCR技术引入合适的酶切位点扩增出来，随后与T载体进行连接。将连接好的质粒转化大肠杆菌进行扩增，随后对扩增好的质粒进行酶切，得到含有粘性末端的片段。将该片段与同样经过双酶切的载体进行连接，转化大肠杆菌后即可得到重组质粒。