1、加热排气打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀。
2、保温保压当锅内压力升到1Kg/cm2时，控制热源，维持压力至15分钟。
3、出锅切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力降至0时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。否则会因锅内压力较高，打开气阀后造成的压力差可能使容器内的培养基喷溅造成棉塞沾染培养基而发生污染，甚至使容器爆炸。
4、处理灭菌后，通常将实验用具放入60℃~80℃烘箱中烘干，以除去灭菌时的水分，避免引起污染。注意事项：1、物品放置的要求整齐、稳定。并需要留出空隙。2、加盖时将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内，在一两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。3、灭菌结束时打开灭菌锅盖时，注意不要把脸靠近，否则蒸汽会对脸造成伤害。
