有以下两种方法：
1、用手握住鱼体腹部，稍一用劲，肛门扩张，生殖孔(也就是肉眼能看清的第二个孔)，能随之扩张的是雌鱼，不能扩张的是雄鱼。
2、雌鱼腹部的臀鳍前方有3个孔，即肛门、生殖孔和泌尿孔，它们连成一体，统称为泌尿生殖孔。这三个孔中，生殖孔居中，很细小，平时肉眼不易分辩，开口于肛门与泌尿孔之间，细心观察才能识别，内与输卵管相通。
雄鱼的泌尿生殖孔内只有两个开孔，即肛门和泄殖孔。泄殖孔开口于小圆柱状的白色突起的顶端。在生殖期间，此圆柱奖突起略向下垂，挤压腹部即有精液溢出。
另外，市场的罗非鱼都是雄的，不用分辨。雌的非常小，所以罗非鱼的卵是在雄性激素，就是早年的那种避孕药里泡大的。
罗非鱼是我国主要养殖水产品。其肉质鲜美，少刺，蛋白质含量高，富含人体所需的8种必需氨基酸，其中谷氨酸和甘氨酸含量特别高。罗非鱼因以上特点而深受人们喜爱，素有“白肉三文鱼”、“21世纪之鱼”之称，近年已成为养殖、加工、出口的热点之一。
