伊莎贝拉一世共有五个女儿，长女为阿拉贡的伊莎贝拉，次女为胡安娜，三女为阿拉贡的玛丽亚，四女为安娜，五女为阿拉贡的凯瑟琳。
阿拉贡的伊莎贝拉(1470年10月1日-1498年8月23日），初嫁葡萄牙阿丰索王储，阿丰索去世后改嫁，成为葡萄牙国王曼努埃尔一世的王后，后难产而死，其子米格尔两岁时夭折。
胡安娜(1479年11月6日-1555年4月13日），伊莎贝拉一世的继任者，嫁与马克西米利安一世之子腓力一世。因患有精神疾病，人称“疯女”，先后被父亲、丈夫和儿子控制，软禁在修道院，因而只是名义上的女王。
阿拉贡的玛丽亚(1482年6月29日-1517年3月7日），其姐伊莎贝拉去世后嫁给姐夫曼努埃尔一世，生有七子三女。
安娜(生于1482年7月1日），玛丽亚的孪生妹妹，出生当天夭折。
阿拉贡的凯瑟琳(1485年12月15日-1536年1月7日），先嫁给英格兰王国国王亨利七世之子亚瑟王子，亚瑟去世后改嫁亚瑟之弟亨利（后来的亨利八世），并因后者登基而成为英国王后。
