1.母种制作
①培养基配方
a. 马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g、水1000ml;
b. 马铃薯200g、蔗糖20g、KH2PO4 2g,MgSO4 0.5g、维生素B1 20毫克、琼脂20g、水1000ml;
c. 马铃薯100g、麸皮100克、蔗糖20g、KH2PO4 1g,MgSO4 0.5g、琼脂20g、水1000ml。
②培养基配制和分装试管应注意的问题
a. 马铃薯要去皮、挖除芽,麸皮要新鲜,各种成分称量要准确,配制过程中葡萄糖要最后加入,配好后要定容,自然PH。
b. 分装试管时,培养基不能沾在试管口及管口附近。
③灭菌和摆放斜面
高压蒸汽灭菌121℃(0.107MPa)30分钟。注意放干冷空气要彻底。出锅摆斜面,冷却。
④无菌接种、恒温培养
按常规无菌操作接种。于25-28℃,遮光、培菌。注意待菌丝接近长满斜面时,停止培菌,保留较嫩的母种斜面,在转接时菌丝体易切割。
2.原种和生产种制作
①培养基配方(参考)
a.棉籽皮 80%、麸皮 17%、糖 1%、石膏 1%、石灰 1%;
b.阔叶树木屑 77%、麸皮 15%、玉米面 5%、糖 1%、石膏 1%、石灰 1%;
c.棉籽皮 40%、木屑 40%、麸皮 12%、玉米面 5%、糖 1%、石膏 1%、石灰 1%。
料的含水量60%-65%,灭菌前的PH7.0-7.5.
②装瓶装袋要快,防止料变酸
③灭菌高压蒸汽灭菌126-127℃(0.14-0.15MPa)2.0-2.5小时。注意放干冷空气。
常压灭菌100℃,12小时以上,闷12小时。注意开始供汽要猛、快,维持汽要稳。灭菌时间长短要视料袋大小和数量,排袋方式。
④料袋出锅冷却至28℃,按无菌操作接种,1支母种能接原种5-6瓶,1瓶原种能接生产种30袋左右(一头接种)。
⑤培菌温度25-28℃,相对湿度60%-70%,遮光、通风、换气及袋的透气,防虫防鼠。
原种菌龄25天左右,生产种菌龄30天左右。